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賽默飛BCA蛋白定量試劑盒說明書

更新時(shí)間:2026-01-06點(diǎn)擊次數(shù):384
 在生命科學(xué)研究與生物制藥開發(fā)中,精確測定蛋白質(zhì)濃度是Western BlotELISA、蛋白純化等幾乎所有下游實(shí)驗(yàn)成功的首要步驟。在眾多定量方法中,BCABicinchoninic Acid)法因其靈敏度高、操作簡便、抗干擾能力強(qiáng)而成為實(shí)驗(yàn)室的通用標(biāo)準(zhǔn)。

 

一、 核心優(yōu)勢:為什么選擇賽默飛的BCA試劑盒?

與傳統(tǒng)的Bradford法或Lowry法相比,賽默飛的BCA試劑盒具備多項(xiàng)滿足現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室需求的突出優(yōu)勢:

1. 更廣泛的兼容性:對樣品中常見濃度的去垢劑(如SDS、Triton X-100 和還原劑(如DTT、β-巰基乙醇) 具有更強(qiáng)的耐受性,顯著減少了樣品制備帶來的干擾。

2. 更高的靈敏度與更寬的線性范圍:檢測范圍通常可達(dá)20-2000 μg/mL,標(biāo)準(zhǔn)曲線線性優(yōu)異(R² > 0.99),既能檢測微量樣品,也能準(zhǔn)確定量高濃度樣本,無需頻繁稀釋。

3. 出色的穩(wěn)定性:顯色反應(yīng)完成后,吸光度在室溫下可穩(wěn)定數(shù)小時(shí),特別適合高通量96孔板操作,無需緊張地即時(shí)讀數(shù)。

4. 靈活的操作形式:提供微孔板法和試管法兩種標(biāo)準(zhǔn)操作程序,適配不同通量和儀器需求。

二、 產(chǎn)品核心信息與實(shí)驗(yàn)方案

賽默飛提供多種規(guī)格的BCA試劑盒(如貨號23225、23227等),經(jīng)典套裝通常包含以下組分:

核心組分

作用與說明

試劑A

含有BCA鈉鹽、碳酸鈉等成分的堿性溶液。

試劑B

含有硫酸銅的4%溶液,作為反應(yīng)催化劑。

蛋白標(biāo)準(zhǔn)品

已知精確濃度的牛血清白蛋白溶液,通常為2 mg/mL,用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

標(biāo)準(zhǔn)操作流程(微孔板法):

工作液配制:按50:1的體積比混合試劑A與試劑B,充分混勻。此工作液室溫下可穩(wěn)定24小時(shí)。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:用與樣品相同的緩沖液,將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋為一系列已知濃度(如0, 125, 250, 500, 750, 1000, 1500, 2000 μg/mL)。

加樣與反應(yīng):在微孔板中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品(通常25 μL),再加入200 μL BCA工作液,輕輕震蕩混勻。

孵育與測定:蓋上板蓋,于37°C孵育30分鐘,或60°C孵育15分鐘(高溫可提高靈敏度)。隨后在酶標(biāo)儀上測定562 nm處的吸光度值。

計(jì)算濃度:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品吸光度值,計(jì)算未知樣品的蛋白濃度。

三、 關(guān)鍵技巧與注意事項(xiàng)

為了獲得可靠的數(shù)據(jù),以下幾點(diǎn)至關(guān)重要:

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線是關(guān)鍵:每次實(shí)驗(yàn)都必須制作新鮮的標(biāo)準(zhǔn)曲線,且標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣品的基質(zhì)(緩沖液成分)應(yīng)盡可能一致。

2. 控制孵育溫度與時(shí)間:孵育時(shí)間和溫度直接影響顯色深度,需確保所有孔的反應(yīng)條件一致。推薦使用恒溫孵育器而非室溫放置。

 

3. 樣品顏色干擾:如果樣品本身有顏色,需設(shè)置樣品背景對照孔(用PBS代替BCA工作液),在最終計(jì)算時(shí)扣除背景值。

4. 數(shù)據(jù)有效性判斷:樣品的吸光度值應(yīng)落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性區(qū)間內(nèi)。若超出范圍,需對樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋后重新測定。

四、 典型應(yīng)用場景

1. 蛋白純化過程監(jiān)控:快速測定洗脫組分中的蛋白濃度,繪制純化圖譜。

2. 細(xì)胞與組織裂解液定量:為Western Blot等實(shí)驗(yàn)進(jìn)行上樣量均一化。

3. 抗體濃度測定:用于雜交瘤上清或純化后抗體的初步定量。

4. 藥物研發(fā)與質(zhì)量控制:在生物制藥工藝中監(jiān)測蛋白表達(dá)量與產(chǎn)物濃度。

賽默飛代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司,提供賽默飛BCA蛋白定量試劑盒等產(chǎn)品。

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司是中關(guān)村高新技術(shù)企業(yè),于2017年在北京成立。百奧創(chuàng)新在產(chǎn)品自主研發(fā)的同時(shí),也與全球多家生命科學(xué)試劑供應(yīng)商建立良好的合作關(guān)系,基于客戶第一的核心理念,向全國10000+客戶提供200000+優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。公司以北京運(yùn)營中心為主體,在天津、上海、浙江、江蘇、廣州、深圳、武漢、成都、重慶等地建立辦事處及聯(lián)絡(luò)中心,并建有北京、天津、深圳三大專業(yè)化庫存與物流基地,以更好地服務(wù)全國客戶。

 

 

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